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Title: Obtención de células mesenquimales preservadas de sangre de cordón umbilical cultivadas con lisado de plasma rico en plaquetas
Title in english: Obtaining mesenchymal preserved cord blood lysate cultured with platelet rich plasma
Author: Bonilla Villanueva, Marco Antonio
Date: 5-Feb-2015
Abstract: Introducción: Las células madre mesenquimales (MSC) poseen gran potencial terapéutico, se han identificado MSC de diferentes fuentes, incluido la gelatina de wharton del cordon umbilical, existen brechas de conocimiento acerca de la obtencion de MSC de unidades de sangre de cordon (SCU), y la optimizacion del cultivo para la expansion de MSC a partir de UCB criopreservadas . El objetivo de este trabajo fue aislar y expandir MSC de SCU criopreservadas cultivadas con lisado de plasma rico en plaquetas.(LPRP) Materiales y métodos: Se realizó un estudio experimental de laboratorio. Se recolecto SCU de 21 maternas del servicio de ginecologia del Hospital Militar Central desde enero de 2013 a octubre de 2014 previa firma del consentimiento informado, se procesaron, congelaron (3 meses) y descongelaron , se verifico la viabilidad celular pre y pos congelamiento posterior al descongelamiento fueron cultivadas en medio DMEM LG suplementado con LPRP, se realizo citometria de flujo para CD34, CD45,CD73, CD90 y CD105 y se indujo diferenciación osteogénica a las celulas adherentes. Se aplicó un análisis estadístico de diferencia de medias para probar los determinantes del crecimiento. Resultados: Se recolectaron 21 muestras de sangre de cordón umbilical, obteniendo conteos de células nucleadas superiores a 200´000.000. La viabilidad promedio precongelamiento fue del 98,6% con D.E. 2,99. Con un descenso del 26,37% luego del descongelamiento. Se logró crecimiento de células madre mesenquimales en el 57,14%. En seis muestras se indujo diferenciación osteogénica, lográndose en el 100%. No hubo una diferencia significativa al comparar las medias del conteo de células nucleadas, la viabilidad precongelamiento y postdescongelamiento cuando hubo crecimiento de MSC o no. Conclusiones: Este estudio encontro 57,14% de celulas adherentes provenientes de SCU criopreservadas, cultivadas con DMEM-LG+LPRP, las cuales fueron positivas para induccion osteogenica y fenotipo MSC.
Abstract: Introduction: Mesenchymal stem cells (MSC) have great therapeutic potential have been identified MSC from different sources, including Wharton's jelly of the umbilical cord, there are gaps in knowledge about obtaining MSC units of cord blood (UCB) and the optimization of culture for the expansion of MSC from cryopreserved UCB. The aim of this work was to isolate and expand MSC cryopreserved UCB lysate cultured with platelet rich plasma (LPRP) Materials and methods. An experimental laboratory study was conducted. SCU 21 native service gynecology of the Central Military Hospital from January 2013 to October 2014 after signing the informed consent was collected, processed, frozen (3 months) and thawed, pre Cell viability was verified and after subsequent freeze to thawing were cultured in DMEM medium supplemented with LPRP LG, flow cytometry for CD34, CD45, CD73, CD90 and CD105 was performed and adherent cells to osteogenic differentiation was induced. A statistical analysis of mean difference was applied to test the determinants of growth. Results: 21 blood samples were collected from the umbilical cord, obtaining 200'000.000 counts above nucleated cells. The average viability was 98.6% precongelamiento with DE 2.99. With a decrease of 26.37% after thawing. Mesenchymal stem cell growth was achieved in 57.14%. Six samples was induced osteogenic differentiation, achieving 100%. There was no significant difference when comparing the mean difference nucleated cell count, viability and the precongelamiento postdescongelamiento when there was no growth or MSC. Conclusions: This study found 57.14% of adherent cells from cryopreserved UCB, cultured with DMEM-LG + LPRP, which were positive for osteogenesis induction and MSC phenotype.
Keywords LEMB: CORDON UMBILICAL
CELULAS MADRE
CULTIVO DE CELULAS HUMANAS
PLAQUETAS SANGUINEAS
Appears in Collections:Ginecología y Obstetricia

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