Obtención de células mesenquimales preservadas de sangre de cordón umbilical cultivadas con lisado de plasma rico en plaquetas

Abstract

Introducción: Las células madre mesenquimales (MSC) poseen gran potencial terapéutico, se han identificado MSC de diferentes fuentes, incluido la gelatina de wharton del cordon umbilical, existen brechas de conocimiento acerca de la obtencion de MSC de unidades de sangre de cordon (SCU), y la optimizacion del cultivo para la expansion de MSC a partir de UCB criopreservadas . El objetivo de este trabajo fue aislar y expandir MSC de SCU criopreservadas cultivadas con lisado de plasma rico en plaquetas.(LPRP) Materiales y métodos: Se realizó un estudio experimental de laboratorio. Se recolecto SCU de 21 maternas del servicio de ginecologia del Hospital Militar Central desde enero de 2013 a octubre de 2014 previa firma del consentimiento informado, se procesaron, congelaron (3 meses) y descongelaron , se verifico la viabilidad celular pre y pos congelamiento posterior al descongelamiento fueron cultivadas en medio DMEM LG suplementado con LPRP, se realizo citometria de flujo para CD34, CD45,CD73, CD90 y CD105 y se indujo diferenciación osteogénica a las celulas adherentes. Se aplicó un análisis estadístico de diferencia de medias para probar los determinantes del crecimiento. Resultados: Se recolectaron 21 muestras de sangre de cordón umbilical, obteniendo conteos de células nucleadas superiores a 200´000.000. La viabilidad promedio precongelamiento fue del 98,6% con D.E. 2,99. Con un descenso del 26,37% luego del descongelamiento. Se logró crecimiento de células madre mesenquimales en el 57,14%. En seis muestras se indujo diferenciación osteogénica, lográndose en el 100%. No hubo una diferencia significativa al comparar las medias del conteo de células nucleadas, la viabilidad precongelamiento y postdescongelamiento cuando hubo crecimiento de MSC o no. Conclusiones: Este estudio encontro 57,14% de celulas adherentes provenientes de SCU criopreservadas, cultivadas con DMEM-LG+LPRP, las cuales fueron positivas para induccion osteogenica y fenotipo MSC.